在卵母細(xì)胞漿內(nèi)單精子注射(ICSI)之前,需要從卵母細(xì)胞中除去卵丘和顆粒細(xì)胞,使得卵母細(xì)胞透明帶表面暴露,以便微型工具容易進(jìn)行夾持和注射處理。顆粒細(xì)胞剝離可以水解將卵丘細(xì)胞和顆粒細(xì)胞粘連在一起的透明質(zhì)酸,用比卵母細(xì)胞直徑略大的細(xì)孔移液管吹打細(xì)胞團(tuán),有助于卵丘細(xì)胞和顆粒細(xì)胞細(xì)胞的脫落。
使用方法:
卵母細(xì)胞-卵丘復(fù)合物(OCCs)置于一滴用石蠟培養(yǎng)油覆蓋的顆粒細(xì)胞剝離液(100-150 μL),如果在組織培養(yǎng)皿中需要100-200μL顆粒細(xì)胞剝離液。30 至 45 秒后,用細(xì)孔玻璃移液管吹打OCCs,使弱化的顆粒細(xì)胞團(tuán)松開,獲得帶有放射冠的卵母細(xì)胞。然后將卵母細(xì)胞轉(zhuǎn)移至含有 100-150 μL 含人血清白蛋白HSA(5 mg/mL)的 HEPES 培養(yǎng)基液滴中,并使用窄口玻璃移液管輕輕吹打以除去冠狀放射細(xì)胞。(注意:用于從顆粒細(xì)胞團(tuán)中剝離卵母細(xì)胞的移液管內(nèi)徑應(yīng)在 250 至 300 μm 之間。用于去除內(nèi)層放射冠細(xì)胞的移液管內(nèi)徑應(yīng)在135-150 μm 之間。)然后再用一系列(4-5個(gè))100-150 μL 含有HSA(5 mg/mL)的 HEPES 培養(yǎng)基液滴進(jìn)一步洗滌卵母細(xì)胞,以除去過量的透明質(zhì)酸酶和已分離的卵丘細(xì)胞。此時(shí),卵母細(xì)胞即可以進(jìn)行ICSI操作。