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本產(chǎn)品已在美國(guó)專利商標(biāo)局（USPTO）注冊(cè)，專為玻璃化冷凍而設(shè)計(jì)，用于人類輔助生殖技術(shù)中冷凍卵母細(xì)胞、不同階段的胚胎和生殖組織（卵巢和睪丸）。

使用方法（23-27℃）

1.將平衡液（ES）和冷凍液（VS）從2-4℃的冰箱中取出，平衡至室溫（23-27℃）。

2.準(zhǔn)備好液氮容器并確保內(nèi)部的液氮有足夠的深度來浸沒冷凍支架，放置于顯微鏡附近。

3.將患者必要的信息標(biāo)記在每個(gè)無菌冷凍解凍板或者培養(yǎng)皿（falcon 3002）和iVitri^?-straw或-EZ載桿上。

4.在無菌操作下，取兩滴ES溶液（每滴50-100μL）分別置于冷凍解凍板或者培養(yǎng)皿的上半部分（如圖1所示），分別記為ES1和ES2。 

5.將卵母細(xì)胞或者胚胎轉(zhuǎn)置于ES1中6分鐘，移動(dòng)卵母細(xì)胞或者胚胎一次，然后將細(xì)胞在ES2中再平衡6分鐘，不可擾動(dòng)。（注意：卵母細(xì)胞或胚胎會(huì)收縮，然后逐漸恢復(fù)到原始大小，表明平衡完成。對(duì)于卵母細(xì)胞，可根據(jù)需要將ES 稀釋成不同的濃度。）

6.在上述ES平衡期間，無菌條件下取兩滴VS溶液（50-100μL）分別置于冷凍解凍板或者同一培養(yǎng)皿的下半部分（圖1所示），記為VS1和VS2。

7.將卵母細(xì)胞和胚胎以最小體積的液滴從ES2轉(zhuǎn)移至VS1中靜置30秒，然后再置于VS2中30秒。

8.將iVitri^?-straw或-EZ載桿放在顯微鏡下（iVitri^?標(biāo)志朝上），然后調(diào)整焦點(diǎn)于頂部的黑色標(biāo)記處，再把卵母細(xì)胞或胚胎（1?3個(gè)）置于黑色標(biāo)記附近，同時(shí)去除過量的冷凍液，使所含冷凍液體積保持最?。?/span>0.2μL）（圖2），黑色標(biāo)記使加載桿套更容易。

9.握住IVitri^?手柄端，將iVitri^?-straw或者-EZ載桿迅速地插入到新鮮的液氮中（圖2）。

10.用長(zhǎng)鑷子（非手術(shù)鉗）夾住載桿套，將其插入液氮中直到停止起氣泡后，蓋入載桿并輕輕擰緊，注意不要將iVitri^?-straw或-EZ載桿從液氮中取出。

11.將iVitri^?-straw或者-EZ載桿放在冷凍支架中，使其載桿套端朝下并儲(chǔ)存在液氮中。

 補(bǔ)充說明

若冷凍卵母細(xì)胞時(shí)，需提前將卵子置于HEPES（含12mg/mL rHSA）和ES（1:1）混合液滴中平衡4分鐘。